เห็ดซางฮวง

สำหรับการเก็บตัวอย่างต่างๆ ในการพัฒนาแบบไม่อาศัยเพศ สายพันธุ์ถูกฉีดเข้าไปใน PDA ที่อุณหภูมิ 28°C ในที่มืด; ไมซีเลียทั้งหมดบนจานถูกรวบรวมและบดเป็นผงโดยใช้ไนโตรเจนเหลวในการสกัด RNA สำหรับการผลิตร่างกายที่ออกผล ไมซีเลียของสายพันธุ์นี้ได้รับการฉีดวัคซีนในขวดขนาด 250 มล. ที่มี PDS เหลว 100 มล. (มันฝรั่ง 20%, ขี้เลื่อยต้นมัลเบอร์รี่ 2%) จากนั้นขวดแก้วถูกบ่มที่อุณหภูมิ 28°ซ ในเครื่องปั่น 200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 วัน ส่วนขอนไม้ท่อนสั้นที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วได้รับการเพาะเลี้ยงเชื้อราจากขวดเดียวกันโดยวิธีการวางไข่ด้านบน ( Hur, 2008) เพาะในที่มืดที่อุณหภูมิ 30°C โดยมีความชื้นสัมพัทธ์ 96% เป็นเวลา 2 เดือน จากนั้นคงไว้ที่อุณหภูมิ 30°C ภายใต้รอบมืด/แสง 17:7 ชม. จนกว่าจะเก็บ ผลสดทั้งหมดถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ และบดเป็นผงโดยใช้เครื่องบด จากนั้นบดเป็นผงต่อไปโดยใช้ไนโตรเจนเหลวสำหรับการสกัด RNA Total RNA สกัดได้จากระยะพัฒนาการแบบไม่อาศัยเพศของ เห็ดซางฮวง ที่แตกต่างกัน ได้แก่ อายุ 10 วัน (M10d) และอายุ 20 วัน (M20d) รวมถึงจากระยะพัฒนาการทางเพศที่แตกต่างกัน ได้แก่ อายุ 1 ปี (OY) และ 3 ปี เก่า (TY) cDNA ถูกสังเคราะห์และดำเนินการ PCR เชิงปริมาณตามที่รายงานก่อนหน้านี้ ( Shao et al., 2019). การขยาย qPCR ดำเนินการด้วยชุด SYBR Green (Takara) และระบบ Bio-Rad CFX96TM (Hercules, CA, สหรัฐอเมริกา) ความเสถียรของการแสดงออกของยีนของแอคติน, β-tubulin, α-tubulin และ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) ถูกกำหนดใน M10d, M20d, OY และ TY และพบว่าทั้ง α-tubulin และ GAPDH มีความเสถียรใน ระยะต่างๆ ของเชื้อรา ดังนั้นจึงใช้ GAPDH เป็นตัวควบคุมภายในในการศึกษานี้ ค่าการแสดงออกได้มาจากการทำให้เป็นมาตรฐานของยีนควบคุมและใช้วิธี 2 –Δ Δ Ct สำหรับการคำนวณระดับการแสดงออกของยีนสัมพัทธ์ การทดลองทั้งหมดดำเนินการในหกซ้ำ และข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± SE ของหกซ้ำ ไพรเมอร์แสดงอยู่ในตารางเสริม S1